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PEI線性轉(zhuǎn)染試劑特點及常見問題

 更新時間:2022-11-24 點擊量:1349

一、PEI線性轉(zhuǎn)染試劑

PEI又稱為線性化聚乙烯亞胺,是人工合成的含有高密度正電荷的有機大分子陽離子聚合物PEIDNA通過正負電荷的相互吸引形成復合物,是較為有效的聚陽離子型基因載體,轉(zhuǎn)染效率高PEI轉(zhuǎn)染試劑可以方便地進行化學修飾,并且不會像脂質(zhì)體一樣破壞細胞結(jié)構(gòu),所以相對毒性較低。

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二、PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(24765-1)特點

·轉(zhuǎn)染效率高,細胞毒性低;

·蛋白表達量高;

·節(jié)約成本:PEI至少能夠降低40%的轉(zhuǎn)染試劑總成本;

·適用于HEK293等真核細胞的轉(zhuǎn)染;

·適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染;

·適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件;

·無機試劑,無動物源成分;

·產(chǎn)品穩(wěn)定,質(zhì)控嚴格;

·工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化,適合小規(guī)模培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應器。

三、PEI轉(zhuǎn)染試劑性能

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1 轉(zhuǎn)染PEI后的抗體表達

500mL HEK293細胞(ACE)CHO細胞(BDF)細胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染LPEIPEI MaxPEI proTM。采用蛋白-A HPLC法檢測單克隆抗體曲妥珠單抗(AB)Palivizumab單抗(CD)B72-3(EF)的滴度,與LPEI(PEI 25K)相比,當使用PEI MaxPEI proTM時,三種抗體的表達量都較高,但使用PEI Max試劑轉(zhuǎn)染能使所有抗體都有最高表達。由此可見,PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(MW 40000)具有更高的轉(zhuǎn)染效率。

四、轉(zhuǎn)染中的常見問題

1.轉(zhuǎn)染效率低

原因:(1)細胞活力:使用活力好傳代小于15代的細胞。

(2)細胞接種密度高/低:適當降低/增加接種密度。

  (3)PEI/DNA比率不合適:進行不同基因轉(zhuǎn)染時應對PEIDNA的比例進行優(yōu)化,以達到最適比例。

(4)質(zhì)粒片段較大:可根據(jù)實際實驗需要調(diào)整,如適當增加轉(zhuǎn)染質(zhì)粒總量等。

  (5)混合方式不當:質(zhì)粒DNAPEI溶液混合時避免渦旋。同時要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。

2.細胞毒性高

原因:(1)轉(zhuǎn)染液孵育時間過長:過長時間 PEI/DNA 復合體會導致細胞毒性。

(2)細胞接種密度低:適當增加接種密度。

(3)PEI/DNA比例高:優(yōu)化合適的PEIDNA的比例。

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