一、PEI線性轉(zhuǎn)染試劑
PEI又稱為線性化聚乙烯亞胺,是人工合成的含有高密度正電荷的有機大分子陽離子聚合物。PEI與DNA通過正負電荷的相互吸引形成復合物,是較為有效的聚陽離子型基因載體,轉(zhuǎn)染效率高。PEI轉(zhuǎn)染試劑可以方便地進行化學修飾,并且不會像脂質(zhì)體一樣破壞細胞結(jié)構(gòu),所以相對毒性較低。
二、PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(24765-1)特點
·轉(zhuǎn)染效率高,細胞毒性低;
·蛋白表達量高;
·節(jié)約成本:PEI至少能夠降低40%的轉(zhuǎn)染試劑總成本;
·適用于HEK293等真核細胞的轉(zhuǎn)染;
·適用于貼壁細胞和懸浮細胞的轉(zhuǎn)染;
·適用于有血清和無血清的轉(zhuǎn)染條件;
·無機試劑,無動物源成分;
·產(chǎn)品穩(wěn)定,質(zhì)控嚴格;
·工藝流程適用范圍廣,容易優(yōu)化,適合小規(guī)模培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶到大規(guī)模的生物反應器。
三、PEI轉(zhuǎn)染試劑性能
圖1 轉(zhuǎn)染PEI后的抗體表達
500mL HEK293細胞(A、C、E)和CHO細胞(B、D、F)細胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)染LPEI、PEI Max和PEI proTM。采用蛋白-A HPLC法檢測單克隆抗體曲妥珠單抗(A、B)、Palivizumab單抗(C和D)和B72-3(E和F)的滴度,與LPEI(PEI 25K)相比,當使用PEI Max和PEI proTM時,三種抗體的表達量都較高,但使用PEI Max試劑轉(zhuǎn)染能使所有抗體都有最高表達。由此可見,PEI Max轉(zhuǎn)染試劑(MW 40000)具有更高的轉(zhuǎn)染效率。
四、轉(zhuǎn)染中的常見問題
1.轉(zhuǎn)染效率低
原因:(1)細胞活力:使用活力好傳代小于15代的細胞。
(2)細胞接種密度高/低:適當降低/增加接種密度。
(3)PEI/DNA比率不合適:進行不同基因轉(zhuǎn)染時應對PEI和DNA的比例進行優(yōu)化,以達到最適比例。
(4)質(zhì)粒片段較大:可根據(jù)實際實驗需要調(diào)整,如適當增加轉(zhuǎn)染質(zhì)粒總量等。
(5)混合方式不當:質(zhì)粒DNA和PEI溶液混合時避免渦旋。同時要注意PEI加入 DNA溶液中的順序。
2.細胞毒性高
原因:(1)轉(zhuǎn)染液孵育時間過長:過長時間 PEI/DNA 復合體會導致細胞毒性。
(2)細胞接種密度低:適當增加接種密度。
(3)PEI/DNA比例高:優(yōu)化合適的PEI和DNA的比例。
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